潘金金1 2 孫建濤1 張青林1 陳素娟2 薛素強1*
（1.廣州市華南農(nóng)大生物藥品有限公司，廣東 廣州 511300 ； 2.揚州大學獸醫(yī)學院，江蘇 揚州 225009）
2015年7月江蘇某農(nóng)戶養(yǎng)殖的快大型黃羽肉雞發(fā)病，病雞主要表現(xiàn)為精神萎頓，食欲減退，發(fā)熱，張口呼吸，死亡率15%左右。經(jīng)臨床和實驗室診斷確診為雞毒支原體和H9亞型禽流感混合感染。現(xiàn)將診斷報告介紹如下。
1. 發(fā)病情況
該農(nóng)戶共飼養(yǎng)快大型黃羽肉雞5000羽；雞群從25日齡開始發(fā)病，28日齡蔓延至全群，病程10天以上，平均每天死亡50多只，死亡高峰出現(xiàn)在發(fā)病后第5天，共125只。31日齡就診時，已死亡400多只。雞群在2日齡和7日齡使用新城疫-支氣管炎二聯(lián)活疫苗滴鼻點眼，14日齡用雞傳染性法氏囊病毒活疫苗飲水，發(fā)病時已使用恩諾沙星等抗生素，但效果欠佳。
2. 臨床癥狀
發(fā)病雞主要表現(xiàn)為發(fā)熱，精神萎頓，食欲減退，垂頭縮頸，雞冠及肉髯暗紅，張口呼吸，夜間安靜的時候有“呼嚕”聲，部分雞流出粘性鼻液，部分雞眼角內(nèi)側(cè)有泡沫樣淚液流出，部分雞伴有腹瀉并排出黃綠色稀糞癥狀。
3 剖檢病變
剖檢可見喉頭、氣管粘膜充血、出血，氣管內(nèi)充滿粘液，肺臟出血，氣囊渾濁、有黃色干酪樣物質(zhì)，心冠脂肪有針尖樣出血，部分雞肝臟略顯腫大、有少量出血點，脾臟腫大、部分有白色斑點狀壞死，腎臟腫大、部分有尿酸鹽沉積，盲腸扁桃體腫大，腺胃粘膜充血，肌胃角質(zhì)層下有斑點狀潰瘍，胰腺輕微出血、有白色壞死點，腸道黏膜出血。
4 診斷
根據(jù)該病的流行情況、臨床癥狀及剖檢病變的分析，可初步診斷為雞毒支原體（MG）感染，不排除H9亞型禽流感、新城疫和傳染性喉氣管炎、傳染性支氣管炎、傳染性鼻炎、火雞支原體（MM）等疾病。
采集病死雞肝、脾、氣管、肺、胰腺等病變組織，提取樣品DNA和RNA，按照文獻方法[1,2，3]，用PCR鑒定雞毒支原體（MG）呈陽性，火雞支原體（MM）、傳染性喉氣管炎病毒（ILTV）、
“*”為本文通訊作者
傳染性支氣管炎病毒（IBV）和副雞嗜血桿菌（HPG）呈陰性；處理后的樣品接種10日齡SPF雞胚，取致死雞胚的尿囊液，進行血凝（HA）及血凝抑制（HI）試驗[4]，結(jié)果顯示尿囊液有血凝性，且僅抗H9亞型禽流感病毒血清對其血凝性有抑制作用。通過試驗可確診該雞場的疫情為雞毒支原體和H9亞型禽流感病毒混合感染。
5. 治療
立即對雞群、料線、水線、墊料、周圍環(huán)境、進出器具、車輛和人員嚴格消毒，堅持每天1-2次，連續(xù)10天。治療時由于雞群整體發(fā)熱，因此首先考慮用解熱鎮(zhèn)痛藥如卡巴匹林鈣，以恢復食欲和飲水，增強自身體質(zhì)；針對病毒感染選用清瘟敗毒的中草藥如清瘟敗毒散配合禽用干擾素；針對支原體感染選用延胡索酸泰妙菌素（枝原凈）配合使用氟苯尼考；針對腎腫大，也為了防止腎代謝性中毒，選用腎解促進毒素和藥物代謝產(chǎn)物的排泄，減輕腎臟負擔，通調(diào)水道；最后雞群補充維生素C、B族維生素等多維，以增強解毒效果，補充流失的維生素，恢復腸道健康，促進雞群康復。用藥持續(xù)4-5天，且注意上午和下午錯開使用各類藥物，如卡巴匹林鈣、枝原凈、氟苯尼考可在上午使用，清瘟敗毒散、干擾素（干擾素一般不與酸堿藥物混合使用）和腎解可在下午使用，多維可在全天的飼料或飲水中添加。
6. 討論
雞毒支原體（MG）和H9亞型禽流感都是嚴重危害我國養(yǎng)禽業(yè)的重要傳染病。其中MG所引發(fā)的疾病也稱慢性呼吸道病（Chronic Respiratory Disease，CRD），其特征為呼吸啰音、咳嗽、流漿液性鼻液、氣囊炎，嚴重時張口呼吸；其通常與病毒、細菌協(xié)同感染，導致呼吸道癥狀加劇、死亡率增高[5]；在飼養(yǎng)密度大、通風不良或氣溫急劇變化時極易誘發(fā)本病[6,7,8]，有時甚至在用呼吸道途徑接種雞新城疫、傳染性支氣管炎和傳染性喉氣管炎等活疫苗后也可能誘發(fā)本病[9,10]。感染雞毒支原體后雞死亡率不高，主要表現(xiàn)為產(chǎn)蛋率、孵化率降低，出欄期延長和飼料利用率降低，并可間接地增加用藥成本[11,12]，同時造成禽產(chǎn)品中藥物殘留。MG可導致各年齡階段雞感染發(fā)病，其中3-8周齡最易感[5,12]，本病在國內(nèi)禽群中相當普遍，這可能與MG既能通過水平傳播又可通過垂直傳播從而導致防控難度極大有關(guān)。
我國自1994年首次報道從雞群分離到H9N2亞型禽流感病毒（Avian Influenza Virus，AIV）以來[13]，該亞型AIV一直在我國主要的養(yǎng)禽地區(qū)傳播和流行，并不斷地變異和重組。H9亞型AIV感染家禽可導致產(chǎn)蛋下降、生長緩慢、免疫抑制，與其它病原共感染時導致高死亡率[14,15,16]、低生產(chǎn)性能等“連鎖反應(yīng)”，給我國養(yǎng)禽業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失。從目前的流行情況看，白羽肉雞、快大型黃雞和817等快速生長雞是這種“連鎖反應(yīng)”的最重要的受害者；其主要的表現(xiàn)為感染H9亞型AIV后，雞群健康狀況下降，自身免疫能力降低，呼吸道黏膜受損，導致其他病原體如大腸桿菌、沙門氏菌、支原體、傳染性支氣管炎、傳染性鼻炎等繼發(fā)感染，從而引起嚴重的呼吸系統(tǒng)疾病，如卡他性氣管炎、出血性肺炎、氣管支氣管纖維素性炎（栓塞）、氣囊纖維素性炎等，進而引起規(guī)模地死亡、飼料轉(zhuǎn)化率降低、用藥成本升高和藥殘超標等。
從本次發(fā)病的情況看，農(nóng)戶的飼養(yǎng)管理不善和硬件設(shè)施不足是發(fā)病的主要原因。現(xiàn)場的調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在高達35度以上的季節(jié)，雞群密度過大，達到12只/平方米，加之雞舍內(nèi)沒有完善的通風降溫設(shè)施，使得舍內(nèi)溫度過高，雞群熱應(yīng)激過大，從而導致雞群抵抗力下降，誘發(fā)疾病；生物安全措施不到位也是導致本次疾病暴發(fā)的重要原因，舍內(nèi)麻雀、喜鵲等野鳥自由出入，水線、料線、地面墊料等長時間未及時清洗、更換，環(huán)境、雞群也從未消毒等因素都會導致病原微生物快速繁殖，引發(fā)疾病；疫苗免疫因素也是值得思考的一方面，從我們的血清流行病學資料看，H9亞型AIV抗體在快大型肉雞上普遍存在的問題為一針免疫后抗體上升慢、效價不夠高、存在免疫空白期等風險，因此目前國內(nèi)有些養(yǎng)殖公司采取3日齡前做超前免疫，然后10日齡左右加強免疫的方法來避免這些情況的發(fā)生。本次發(fā)病的養(yǎng)戶全程未使用H9亞型AIV疫苗，這樣就更增加了疾病發(fā)生的概率，并且在發(fā)生H9亞型AIV和其他疾病混感時損失會更加嚴重；另外，雞毒支原體和H9亞型AIV通常發(fā)生在較為寒冷的季節(jié)，而此次在炎熱季節(jié)中依然發(fā)生，說明養(yǎng)殖環(huán)境不容樂觀。
參考文獻
1. 張磊. 雞毒支原體JN株的分離鑒定及PCR檢測方法的建立. 山東農(nóng)業(yè)大學碩士論文 2010.
2. 秦璐璐. 雞毒支原體PCR檢測方法的建立. 動物醫(yī)學進展 2009,30（2）：39-42.
3. 苗得園, 孫慧玲, 陳曉峰, 盧冷軼, 張培君, 龔玉梅. 副雞嗜血桿菌的分離鑒定及我國雞傳染性鼻炎的流行狀況分析.
4. Woolcock PR. Avian influenza virus isolation and propagation in chicken eggs. Methods Mol Biol 2008,436:35-46.
5. W Calnek, H John Barnes. Disease of poultry. tenth edition. Ames: Iowa state university press, 1997. 235-296.
6. Soeripto, K G Whithear, G S Cottew, K E Harrigan. Virulence and transmissibility of mycoplama gallisepticun. Aust vet J, 1989, 66: 65-72.
7. Lin M Y, S H Kleven. Egg transmission of two strains of mycoplasma gallisepticum in chickens. Avian Dis, 1982, 26: 487-495.
8. Transcott R B, A E Ferguson, H L Ruhnke. An infection in chickens with a strain of mycoplasma gallisepticum of low virulence. Comp Med, 1974, 38: 341-343.
9. Gross W B. The development of “air sac disease”. Avian Dis, 1961,5: 431-439.
10. Fabricant J, P P levine. Experimental production of complication chronic repitory disease infection (“air sac”disease). Avian Dis, 1962, 6: 13-27.
11. 傅先強. 控制雞霉形體病的新思路. 中國家禽, 2002, 2 (8): 5-6.
12. 陳溥言主編. 獸醫(yī)傳染病學 第五版. 中國農(nóng)業(yè)出版社, 2006: 397-399.
13. 陳伯倫, 張澤紀, 陳偉斌. 禽流感研究：I雞A型流感病毒分離與血清學初步鑒定. 中國獸醫(yī)雜志, 1994, 22（10）: 3-5.
14. Li C, Yu K, Tian G, et al. Evolution of H9N2 influenza viruses from domestic poutry in Mainland China. Virology, 2005, 340(1): 70-83.
15. Zhang P, Tang Y, Liu X, et al. A novel genotype H9N2 influenza virus possessing human H5N1 internal genomes has been circulating in poutry in eatern China since 1998. J Virol, 2009, 83(17): 8248-8438.
16. 李樹純, 李心海, 仲書官等. H9N2亞型禽流感病毒基因組的遺傳進化分析. 病毒學報, 2012, 1(28): 7-14.